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clsgmbh 500286說明書

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clsgmbh 500286說明書


clsgmb MH-3924A

500286凍存培養(yǎng)物
描述從 ACI 大鼠肝癌（細(xì)胞系服務(wù)）體外建立。
生物鼠
組織肝
疾病肝細(xì)胞癌
同義詞MH 3924A、MH3924A、MH-3924 A、MH 3924 A、3924A、莫里斯肝癌 3924A、MH-3924、MH3924、MH 3924
年齡16 個月
形態(tài)學(xué)上皮樣
生長特性粘附的
表達(dá)/突變/易感性clsgmbh 500286
培養(yǎng)基記憶體
中等補充劑10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺、4.5 g/L 葡萄糖
倍增時間25-35 小時
繼代培養(yǎng)去除培養(yǎng)基并使用不含鈣和鎂的 PBS 沖洗貼壁細(xì)胞（T25 為 3-5 ml PBS，T75 細(xì)胞培養(yǎng)瓶為 5-10 ml）。添加Accutase（每T25 1-2 ml，每T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶2.5 ml），細(xì)胞片必須*覆蓋。在環(huán)境溫度下孵育 8-10 分鐘。用培養(yǎng)基 (10 ml) 小心重懸細(xì)胞，以 300 g 離心 3 分鐘，將細(xì)胞重懸于新鮮培養(yǎng)基中，然后分裝到含有新鮮培養(yǎng)基的新燒瓶中。
分流比建議比例為 1:4 至 1:6
播種密度2 x 10^4 細(xì)胞/cm^2
流體更新每 3 到 5 天
冷凍恢復(fù)使用 2xT25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中冷凍管的全部內(nèi)容開始培養(yǎng)。細(xì)胞將在 24-48 小時內(nèi)恢復(fù)。
冷凍培養(yǎng)基CM-1（CLS 目錄號 800150）
處理冷凍保存的培養(yǎng)物細(xì)胞在干冰上冷凍運輸。請確保小瓶仍處于冷凍狀態(tài)。如果不打算立即培養(yǎng)，冷凍管必須在到達(dá)后儲存在 -150°C 以下。如果打算立即培養(yǎng)，請遵循以下說明： 在 37 °C 水浴中快速攪拌，在 40-60 秒內(nèi)快速解凍。水浴應(yīng)該有含有抗菌劑的干凈水。樣品解凍后，立即從水浴中取出冷凍管。一小塊冰塊應(yīng)該仍然存在，小瓶應(yīng)該仍然是冷的。從現(xiàn)在開始，所有操作都應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行。將冷凍管轉(zhuǎn)移到無菌流動柜并用 70% 酒精擦拭。小心打開小瓶，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有 8 ml 培養(yǎng)基（室溫）的 15 ml 離心管中。小心重懸細(xì)胞。以 300 xg 離心 3 分鐘并棄去上清液?？梢允÷噪x心步驟，但在這種情況下，必須在 24 小時后去除剩余的冷凍培養(yǎng)基。在 10 ml 新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基中小心重懸細(xì)胞，并將它們轉(zhuǎn)移到兩個 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。所有進(jìn)一步的步驟都在 Subculture 部分中描述。
增殖培養(yǎng)物的處理一到兩個細(xì)胞培養(yǎng)瓶中裝有細(xì)胞培養(yǎng)基。將整個培養(yǎng)基分別收集在 1 個或 2 個 50 ml 離心管中。小心地向每個 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入 5 ml 細(xì)胞培養(yǎng)基。在顯微鏡下控制細(xì)胞形態(tài)和匯合。在 37 °C 下孵育至少 24 小時。將收集的培養(yǎng)基以 300 xg 離心 3 分鐘，以收集可能在運輸過程中脫落的細(xì)胞。如果可見細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞重懸于 5 ml 細(xì)胞培養(yǎng)基中并轉(zhuǎn)移到 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。在 37 °C 下孵育至少 24 小時。
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